فطرت ڈاٹ کام پر جانے کا شکریہ۔ آپ جس براؤزر کا ورژن استعمال کر رہے ہیں اسے محدود CSS سپورٹ حاصل ہے۔ بہترین تجربے کے لیے، ہم تجویز کرتے ہیں کہ براؤزر کا تازہ ترین ورژن استعمال کریں (یا انٹرنیٹ ایکسپلورر میں مطابقت موڈ کو آف کریں)۔ مزید برآں، مسلسل سپورٹ کو یقینی بنانے کے لیے، اس سائٹ میں اسٹائل یا جاوا اسکرپٹ شامل نہیں ہوگا۔
میلامین ایک تسلیم شدہ کھانے کی آلودگی ہے جو کہ بعض فوڈ کیٹیگریز میں حادثاتی اور جان بوجھ کر موجود ہوسکتی ہے۔ اس مطالعے کا مقصد بچوں کے فارمولے اور دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کی کھوج اور مقدار کی تصدیق کرنا تھا۔ ایران کے مختلف علاقوں سے کل 40 تجارتی طور پر دستیاب کھانے کے نمونوں کا تجزیہ کیا گیا، جن میں بچوں کے فارمولے اور دودھ کے پاؤڈر شامل ہیں۔ نمونوں کے تقریباً میلامین مواد کا تعین ایک اعلیٰ کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی-الٹراوائلٹ (HPLC-UV) سسٹم کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ ایک انشانکن وکر (R2 = 0.9925) 0.1–1.2 μg mL−1 کی حد میں میلامین کا پتہ لگانے کے لیے بنایا گیا تھا۔ مقدار اور پتہ لگانے کی حدیں بالترتیب 1 μg mL−1 اور 3 μg mL−1 تھیں۔ میلمائن کو بچوں کے فارمولے اور دودھ کے پاؤڈر میں ٹیسٹ کیا گیا اور نتائج سے معلوم ہوا کہ شیرخوار فارمولے اور دودھ کے پاؤڈر کے نمونوں میں میلمین کی سطح بالترتیب 0.001–0.095 mg kg−1 اور 0.001–0.004 mg kg−1 تھی۔ یہ اقدار EU قانون سازی اور Codex Alimentarius کے مطابق ہیں۔ یہ نوٹ کرنا ضروری ہے کہ میلامین کی کم مقدار کے ساتھ ان دودھ کی مصنوعات کا استعمال صارفین کی صحت کے لیے کوئی خاص خطرہ نہیں لاتا۔ خطرے کی تشخیص کے نتائج سے بھی اس کی تائید ہوتی ہے۔
میلامین ایک نامیاتی مرکب ہے جس میں مالیکیولر فارمولہ C3H6N6 ہے، جو سائنامائیڈ سے ماخوذ ہے۔ اس کی پانی میں حل پذیری بہت کم ہے اور تقریباً 66% نائٹروجن ہے۔ میلمین ایک وسیع پیمانے پر استعمال شدہ صنعتی کمپاؤنڈ ہے جس میں پلاسٹک، کھاد اور فوڈ پروسیسنگ کے آلات (بشمول فوڈ پیکیجنگ اور کچن کے سامان) 1,2 کی پیداوار میں جائز استعمال کی ایک وسیع رینج ہے۔ میلامین کو بیماریوں کے علاج کے لیے دوائیوں کے کیریئر کے طور پر بھی استعمال کیا جاتا ہے۔ میلامین میں نائٹروجن کا زیادہ تناسب مرکب کے غلط استعمال اور پروٹین کے مالیکیولز کی خصوصیات کو کھانے کے اجزاء3,4 تک پہنچانے کا باعث بن سکتا ہے۔ لہذا، دودھ کی مصنوعات سمیت کھانے کی مصنوعات میں میلمین شامل کرنے سے، نائٹروجن مواد میں اضافہ ہوتا ہے۔ اس طرح، یہ غلطی سے یہ نتیجہ اخذ کیا گیا کہ دودھ میں پروٹین کی مقدار اصل سے زیادہ تھی۔
میلامین کے ہر گرام کے لیے کھانے میں پروٹین کی مقدار میں 0.4% اضافہ ہوگا۔ تاہم، میلامین پانی میں انتہائی گھلنشیل ہے اور زیادہ سنگین نقصان پہنچا سکتا ہے۔ دودھ جیسی مائع مصنوعات میں 1.3 گرام میلامین شامل کرنے سے دودھ میں پروٹین کی مقدار 30%5,6 تک بڑھ سکتی ہے۔ اگرچہ پروٹین کے مواد کو بڑھانے کے لیے جانوروں اور یہاں تک کہ انسانی کھانوں میں میلمائن شامل کیا جاتا ہے7، کوڈیکس ایلیمینٹیریئس کمیشن (سی اے سی) اور قومی حکام نے میلمائن کو فوڈ ایڈیٹیو کے طور پر منظور نہیں کیا ہے اور اسے نگلنے، سانس لینے یا جلد کے ذریعے جذب ہونے کی صورت میں خطرناک قرار دیا ہے۔ 2012 میں، ورلڈ ہیلتھ آرگنائزیشن (WHO) کی بین الاقوامی ایجنسی برائے تحقیق برائے کینسر نے میلامین کو کلاس 2B کارسنجن کے طور پر درج کیا کیونکہ یہ انسانی صحت کے لیے نقصان دہ ہو سکتا ہے۔ میلامین کے طویل مدتی نمائش سے کینسر یا گردے کو نقصان پہنچ سکتا ہے۔ کھانے میں میلامین سیانورک ایسڈ کے ساتھ پیچیدہ ہو کر پانی میں حل نہ ہونے والے پیلے رنگ کے کرسٹل بن سکتے ہیں جو گردے اور مثانے کے بافتوں کے ساتھ ساتھ پیشاب کی نالی کے کینسر اور وزن میں کمی 9,10 کو نقصان پہنچا سکتے ہیں۔ یہ شدید فوڈ پوائزننگ کا سبب بن سکتا ہے اور، زیادہ ارتکاز میں، موت، خاص طور پر نوزائیدہ بچوں اور چھوٹے بچوں میں۔ 11 ورلڈ ہیلتھ آرگنائزیشن (ڈبلیو ایچ او) نے بھی سی اے سی کے رہنما خطوط کی بنیاد پر انسانوں کے لیے میلامین کے قابل برداشت یومیہ انٹیک (TDI) کو 0.2 ملی گرام فی کلوگرام جسمانی وزن پر مقرر کیا ہے۔ بچوں کے فارمولے میں 1 ملی گرام/کلوگرام اور دیگر کھانوں میں 2.5 ملی گرام/کلو گرام۔ 2,7 ستمبر 2008 میں، یہ اطلاع ملی کہ کئی گھریلو شیرخوار فارمولہ بنانے والوں نے اپنی مصنوعات میں پروٹین کی مقدار بڑھانے کے لیے دودھ کے پاؤڈر میں میلمائن شامل کیا تھا، جس کے نتیجے میں دودھ کے پاؤڈر میں زہر پیدا ہوا اور ملک بھر میں میلامین کے زہر کے واقعات رونما ہوئے اور ہسپتالوں میں 200 سے زائد بچے زخمی ہوئے۔ 50,000 13
شہری زندگی کی مشکلات، ماں یا بچے کی بیماری جیسے مختلف عوامل کی وجہ سے ہمیشہ دودھ پلانا ممکن نہیں ہوتا، جس کی وجہ سے شیر خوار بچوں کو دودھ پلانے کے لیے انفینٹ فارمولے کا استعمال کرنا پڑتا ہے۔ نتیجے کے طور پر، بچوں کے فارمولے کو تیار کرنے کے لیے فیکٹریاں قائم کی گئی ہیں جو کہ 14 کی ساخت میں ماں کے دودھ کے زیادہ سے زیادہ قریب ہے۔ بازار میں فروخت ہونے والا شیرخوار فارمولا عام طور پر گائے کے دودھ سے بنایا جاتا ہے اور عام طور پر چربی، پروٹین، کاربوہائیڈریٹس، وٹامنز، معدنیات اور دیگر مرکبات کے ایک خاص مرکب سے بنایا جاتا ہے۔ ماں کے دودھ کے قریب ہونے کے لیے، فارمولے میں پروٹین اور چکنائی کی مقدار مختلف ہوتی ہے، اور دودھ کی قسم پر منحصر ہے، وہ وٹامنز اور معدنیات جیسے آئرن 15 جیسے مرکبات سے مضبوط ہوتے ہیں۔ چونکہ شیر خوار ایک حساس گروپ ہوتے ہیں اور ان میں زہر کا خطرہ ہوتا ہے، اس لیے دودھ کے پاؤڈر کے استعمال کی حفاظت صحت کے لیے بہت اہم ہے۔ چینی شیر خوار بچوں میں میلامین زہر کے معاملے کے بعد دنیا بھر کے ممالک نے اس معاملے پر بھرپور توجہ دی ہے اور اس علاقے کی حساسیت میں بھی اضافہ ہوا ہے۔ لہذا، شیر خوار بچوں کی صحت کی حفاظت کے لیے بچوں کے فارمولے کی پیداوار کے کنٹرول کو مضبوط کرنا خاص طور پر اہم ہے۔ کھانے میں میلامین کا پتہ لگانے کے مختلف طریقے ہیں، جن میں اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی (HPLC)، الیکٹروفورسس، حسی طریقہ، سپیکٹرو فوٹومیٹری اور اینٹیجن-اینٹی باڈی انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ شامل ہیں۔ 2007 میں، یو ایس فوڈ اینڈ ڈرگ ایڈمنسٹریشن (ایف ڈی اے) نے کھانے میں میلمائن اور سائینورک ایسڈ کے تعین کے لیے ایک HPLC طریقہ تیار کیا اور شائع کیا، جو میلمینی مواد کا تعین کرنے کا سب سے مؤثر طریقہ ہے۔
ایک نئی انفراریڈ سپیکٹروسکوپی تکنیک کا استعمال کرتے ہوئے ماپا گیا شیرخوار فارمولہ میں میلامین کی تعداد 0.33 سے 0.96 ملیگرام فی کلوگرام (mg kg-1) تک ہوتی ہے۔ 18 سری لنکا میں کی گئی ایک تحقیق میں پورے دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کی سطح 0.39 سے 0.84 ملی گرام کلوگرام-1 کے درمیان پائی گئی۔ مزید برآں، درآمد شدہ شیر خوار فارمولے کے نمونوں میں بالترتیب 0.96 اور 0.94 mg/kg میلامین کی اعلیٰ سطح موجود تھی۔ یہ سطحیں ریگولیٹری حد (1 ملی گرام/کلوگرام) سے نیچے ہیں، لیکن صارفین کی حفاظت کے لیے ایک مانیٹرنگ پروگرام کی ضرورت ہے۔ 19
کئی مطالعات نے ایرانی شیر خوار فارمولوں میں میلامین کی سطح کا جائزہ لیا ہے۔ تقریباً 65% نمونوں میں میلامین موجود تھا، اوسطاً 0.73 ملی گرام/کلوگرام اور زیادہ سے زیادہ 3.63 ملی گرام/کلوگرام۔ ایک اور تحقیق میں بتایا گیا ہے کہ بچوں کے فارمولے میں میلامین کی سطح 0.35 سے 3.40 μg/kg تک ہے، اوسطاً 1.38 μg/kg ہے۔ مجموعی طور پر، ایرانی شیرخوار فارمولوں میں میلامین کی موجودگی اور سطح کا اندازہ مختلف مطالعات میں کیا گیا ہے، کچھ نمونے جن میں میلامین ریگولیٹری اتھارٹیز (2.5 mg/kg/feed) کی مقرر کردہ زیادہ سے زیادہ حد سے زیادہ ہے۔
کھانے کی صنعت میں دودھ کے پاؤڈر کی بڑی براہ راست اور بالواسطہ کھپت اور بچوں کو دودھ پلانے میں شیرخوار فارمولے کی خصوصی اہمیت کو مدنظر رکھتے ہوئے، اس تحقیق کا مقصد دودھ کے پاؤڈر اور بچوں کے فارمولے میں میلامین کے پتہ لگانے کے طریقہ کار کی توثیق کرنا تھا۔ درحقیقت، اس مطالعے کا پہلا مقصد بچوں کے فارمولے اور دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کی ملاوٹ کا پتہ لگانے کے لیے تیز رفتار، سادہ اور درست مقداری طریقہ تیار کرنا تھا جس میں ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) اور الٹرا وائلٹ (UV) کا پتہ لگانا تھا۔ دوم، اس تحقیق کا مقصد بچوں کے فارمولے اور ایرانی مارکیٹ میں فروخت ہونے والے دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کی مقدار کا تعین کرنا تھا۔
میلمینی تجزیہ کے لیے استعمال ہونے والے آلات خوراک کی پیداوار کے مقام کے لحاظ سے مختلف ہوتے ہیں۔ ایک حساس اور قابل اعتماد HPLC-UV تجزیہ کا طریقہ دودھ اور بچوں کے فارمولے میں میلامین کی باقیات کی پیمائش کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ دودھ کی مصنوعات میں مختلف پروٹین اور چکنائی ہوتی ہے جو میلامین کی پیمائش میں مداخلت کر سکتی ہے۔ لہذا، جیسا کہ سن ایٹ ال نے نوٹ کیا ہے۔ 22، آلات کے تجزیہ سے پہلے ایک مناسب اور موثر صفائی کی حکمت عملی ضروری ہے۔ اس مطالعہ میں، ہم نے ڈسپوزایبل سرنج فلٹرز کا استعمال کیا۔ اس مطالعہ میں، ہم نے بچوں کے فارمولے اور دودھ کے پاؤڈر میں میلمین کو الگ کرنے کے لیے C18 کالم کا استعمال کیا۔ شکل 1 میلامین کا پتہ لگانے کے لئے کرومیٹوگرام دکھاتا ہے۔ اس کے علاوہ، 0.1–1.2 mg/kg melamine پر مشتمل نمونوں کی بازیابی 95% سے لے کر 109% تک تھی، ریگریشن مساوات y = 1.2487x − 0.005 (r = 0.9925) تھی، اور متعلقہ معیاری انحراف (RSD) کی قدروں کی حد %2 سے 0.8 تک تھی۔ دستیاب اعداد و شمار بتاتے ہیں کہ مطالعہ شدہ حراستی رینج (ٹیبل 1) میں طریقہ قابل اعتماد ہے۔ پتہ لگانے کی آلہ کی حد (LOD) اور میلامین کی مقدار کی حد (LOQ) بالترتیب 1 μg mL−1 اور 3 μg mL−1 تھی۔ اس کے علاوہ، میلمین کے UV سپیکٹرم نے 242 nm پر ایک جذب بینڈ کی نمائش کی۔ پتہ لگانے کا طریقہ حساس، قابل اعتماد اور درست ہے۔ یہ طریقہ میلمین کی سطح کے معمول کے تعین کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔
اسی طرح کے نتائج متعدد مصنفین کے ذریعہ شائع کیے گئے ہیں۔ ڈیری مصنوعات میں میلامین کے تجزیہ کے لیے ایک اعلیٰ کارکردگی والا مائع کرومیٹوگرافی-فوٹوڈیوڈ سرنی (HPLC) طریقہ تیار کیا گیا تھا۔ مقدار کی نچلی حدیں دودھ کے پاؤڈر کے لیے 340 μg kg−1 اور 240 nm پر بچوں کے فارمولے کے لیے 280 μg kg−1 تھیں۔ فلازی وغیرہ۔ (2012) نے اطلاع دی ہے کہ HPLC کے ذریعہ شیر خوار فارمولے میں میلامین کا پتہ نہیں چلا۔ تاہم، دودھ کے پاؤڈر کے 8% نمونوں میں 0.505–0.86 ملی گرام/کلوگرام کی سطح پر میلامین موجود تھا۔ Tittlemiet et al.23 نے اسی طرح کا ایک مطالعہ کیا اور اعلی کارکردگی والے مائع کرومیٹوگرافی-ماس اسپیکٹرو میٹری/MS (HPLC-MS/MS) کے ذریعے بچوں کے فارمولے (نمونہ نمبر: 72) کے میلامین مواد کا تعین کیا تقریباً 0.0431–0.346 mg kg−11۔ وینکٹاسامی وغیرہ کے ذریعہ کئے گئے ایک مطالعہ میں۔ (2010)، ایک سبز کیمسٹری اپروچ (بغیر ایسیٹونائٹرائل) اور الٹ فیز ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (RP-HPLC) کا استعمال شیر خوار فارمولے اور دودھ میں میلامین کا اندازہ لگانے کے لیے کیا گیا تھا۔ نمونے کی حراستی کی حد 1.0 سے 80 g/mL تک تھی اور جواب لکیری (r> 0.999) تھا۔ اس طریقہ کار نے 5–40 g/mL کے ارتکاز کی حد سے زیادہ 97.2–101.2 کی بازیابیاں ظاہر کیں اور تولیدی صلاحیت 1.0% نسبتا معیاری انحراف سے کم تھی۔ مزید برآں، مشاہدہ شدہ LOD اور LOQ بالترتیب 0.1 g mL−1 اور 0.2 g mL−124 تھے۔ Lutter et al. (2011) نے HPLC-UV کا استعمال کرتے ہوئے گائے کے دودھ اور دودھ پر مبنی شیر خوار فارمولے میں میلامین کی آلودگی کا تعین کیا۔ میلامین کی تعداد <0.2 سے 2.52 mg kg−1 تک تھی۔ HPLC-UV طریقہ کار کی لکیری متحرک رینج گائے کے دودھ کے لیے 0.05 سے 2.5 mg kg−1 تھی، شیرخوار فارمولے کے لیے 0.13 سے 6.25 mg kg−1 تھی جس کا پروٹین ماس فریکشن <15% تھا، اور 0.25 سے 12.5 mg پروٹین ماس فریکشن کے ساتھ %15 mg kg-1 کے ماس −1 میں پروٹین فارمولہ۔ LOD (اور LOQ) کے نتائج گائے کے دودھ کے لیے 0.03 mg kg−1 (0.09 mg kg−1) بچے کے فارمولے کے لیے 0.06 mg kg−1 (0.18 mg kg−1) <15% پروٹین، اور 0.12 mg kg−1 (0.36 mg) پروٹین فارمولے کے ساتھ %5 kg 15% پروٹین کے ساتھ۔ LOD اور LOQ کے لیے بالترتیب 3 اور 1025 کا سگنل ٹو شور کا تناسب۔ Diebes et al. (2012) نے HPLC/DMD کا استعمال کرتے ہوئے بچوں کے فارمولے اور دودھ کے پاؤڈر کے نمونوں میں میلامین کی سطح کی چھان بین کی۔ شیر خوار فارمولے میں، سب سے کم اور اعلیٰ سطحیں بالترتیب 9.49 mg kg−1 اور 258 mg kg−1 تھیں۔ پتہ لگانے کی حد (LOD) 0.05 mg kg−1 تھی۔
جاوید وغیرہ۔ نے اطلاع دی ہے کہ شیر خوار فارمولے میں میلامین کی باقیات 0.002–2 mg kg−1 کی حد میں تھیں بذریعہ فوئیر ٹرانسفارم انفراریڈ سپیکٹروسکوپی (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1؛ LOQ = 3.5 mg kg−1)۔ Rezai et al.27 نے میلامین کا تخمینہ لگانے کے لیے HPLC-DDA (λ = 220 nm) طریقہ تجویز کیا اور دودھ کے پاؤڈر کے لیے 0.08 μg mL−1 کا LOQ حاصل کیا، جو اس مطالعہ میں حاصل کردہ سطح سے کم تھا۔ سورج وغیرہ۔ سالڈ فیز ایکسٹرکشن (SPE) کے ذریعے مائع دودھ میں میلامین کا پتہ لگانے کے لیے ایک RP-HPLC-DAD تیار کیا۔ انہوں نے بالترتیب 18 اور 60 μg kg−128 کا LOD اور LOQ حاصل کیا، جو موجودہ مطالعہ سے زیادہ حساس ہے۔ Montesano et al. نے 0.05–3 ملی گرام/کلوگرام کی مقدار کی حد کے ساتھ پروٹین سپلیمنٹس میں میلامین مواد کی تشخیص کے لیے HPLC-DMD طریقہ کار کی تاثیر کی تصدیق کی، جو اس مطالعے میں استعمال کیے گئے طریقہ سے کم حساس تھا۔
بلاشبہ، تجزیاتی لیبارٹریز مختلف نمونوں میں آلودگی کی نگرانی کرکے ماحول کو بچانے میں اہم کردار ادا کرتی ہیں۔ تاہم، تجزیہ کے دوران ری ایجنٹس اور سالوینٹس کی ایک بڑی تعداد کے استعمال کے نتیجے میں خطرناک باقیات کی تشکیل ہو سکتی ہے۔ لہذا، آپریٹرز اور ماحولیات پر تجزیاتی طریقہ کار کے منفی اثرات کو کم کرنے یا ختم کرنے کے لیے 2000 میں گرین اینالیٹکل کیمسٹری (GAC) تیار کی گئی تھی۔ میلامین کا پتہ لگانے کے روایتی طریقے جن میں کرومیٹوگرافی، الیکٹروفورسس، کیپلیری الیکٹروفورسس، اور انزائم سے منسلک امیونوسوربینٹ پرکھ (ELISA) کو میلامین کی شناخت کے لیے استعمال کیا گیا ہے۔ تاہم، پتہ لگانے کے متعدد طریقوں میں، الیکٹرو کیمیکل سینسرز نے اپنی بہترین حساسیت، انتخاب، تیزی سے تجزیہ کرنے کا وقت، اور صارف دوست خصوصیات 30,31 کی وجہ سے بہت زیادہ توجہ مبذول کرائی ہے۔ گرین نینو ٹیکنالوجی حیاتیاتی راستوں کو نینو میٹریل کی ترکیب کے لیے استعمال کرتی ہے، جو خطرناک فضلہ اور توانائی کے استعمال کو کم کر سکتی ہے، اس طرح پائیدار طریقوں کے نفاذ کو فروغ دیتی ہے۔ مثال کے طور پر، ماحول دوست مواد سے بنی نانوکومپوزائٹس کو بائیو سینسر میں میلامین 32,33,34 جیسے مادوں کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔
مطالعہ سے پتہ چلتا ہے کہ ٹھوس فیز مائیکرو ایکسٹریکشن (SPME) روایتی نکالنے کے طریقوں کے مقابلے میں اس کی اعلی توانائی کی کارکردگی اور پائیداری کی وجہ سے مؤثر طریقے سے استعمال ہوتا ہے۔ SPME کی ماحولیاتی دوستی اور توانائی کی کارکردگی اسے تجزیاتی کیمسٹری میں نکالنے کے روایتی طریقوں کا ایک بہترین متبادل بناتی ہے اور نمونے کی تیاری کے لیے زیادہ پائیدار اور موثر طریقہ فراہم کرتی ہے۔
2013 میں، وو وغیرہ۔ نے ایک انتہائی حساس اور سلیکٹیو سطح پلازمون گونج (منی-ایس پی آر) بائیو سینسر تیار کیا ہے جو میلامین اور اینٹی میلمین اینٹی باڈیز کے درمیان جوڑے کو استعمال کرتا ہے تاکہ امیونوسے کا استعمال کرتے ہوئے شیرخوار فارمولے میں میلامین کا تیزی سے پتہ لگایا جا سکے۔ ایس پی آر بائیو سینسر ایک امیونواسے کے ساتھ مل کر (میلامین کنجوگیٹڈ بووائن سیرم البومین کا استعمال کرتے ہوئے) استعمال میں آسان اور کم لاگت والی ٹیکنالوجی ہے جس کی شناخت کی حد صرف 0.02 μg mL-136 ہے۔
ناصری اور عباسی نے تجارتی نمونوں میں میلامین کا پتہ لگانے کے لیے گرافین آکسائیڈ-چیٹوسن کمپوزائٹس (GOCS) کے ساتھ مل کر ایک اعلیٰ ممکنہ پورٹیبل سینسر کا استعمال کیا۔ اس طریقہ نے انتہائی اعلیٰ انتخاب، درستگی اور ردعمل ظاہر کیا۔ GOCS سینسر نے قابل ذکر حساسیت (239.1 μM−1)، 0.01 سے 200 μM کی لکیری رینج، 1.73 × 104 کا ایک تعلق مستقل، اور 10 nM تک کا LOD ظاہر کیا۔ مزید یہ کہ چندر شیکھر ایٹ ال کے ذریعہ کیا گیا ایک مطالعہ۔ 2024 میں ماحول دوست اور سرمایہ کاری مؤثر طریقہ اپنایا۔ انہوں نے ماحول دوست طریقے سے زنک آکسائیڈ نینو پارٹیکلز (ZnO-NPs) کی ترکیب کے لیے پپیتے کے چھلکے کے عرق کو کم کرنے والے ایجنٹ کے طور پر استعمال کیا۔ اس کے بعد، شیر خوار فارمولے میں میلامین کے تعین کے لیے ایک منفرد مائیکرو رامن سپیکٹروسکوپی تکنیک تیار کی گئی۔ زرعی فضلے سے حاصل کردہ ZnO-NPs نے ایک قیمتی تشخیصی آلے اور میلامین کی نگرانی اور اس کا پتہ لگانے کے لیے ایک قابل اعتماد، کم لاگت والی ٹیکنالوجی کے طور پر صلاحیت کا مظاہرہ کیا ہے۔
علی زادہ وغیرہ۔ (2024) نے دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کا تعین کرنے کے لیے ایک انتہائی حساس دھاتی-نامیاتی فریم ورک (MOF) فلوروسینس پلیٹ فارم کا استعمال کیا۔ سینسر کی لکیری رینج اور کم پتہ لگانے کی حد، 3σ/S کا استعمال کرتے ہوئے طے کی گئی، بالترتیب 40 سے 396.45 nM (25 μg kg−1 سے 0.25 mg kg−1 کے برابر) اور 40 nM (25 μg kg−1 کے برابر) تھی۔ یہ رینج شیر خوار فارمولے (1 ملی گرام kg−1) اور دیگر خوراک/فیڈ کے نمونوں (2.5 mg kg−1) میں میلامین کی شناخت کے لیے مقرر کردہ زیادہ سے زیادہ باقیات کی سطح (MRLs) سے کافی نیچے ہے۔ فلوروسینٹ سینسر (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) نے دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کا پتہ لگانے میں HPLC39 سے زیادہ درستگی اور زیادہ درست پیمائش کی صلاحیت کا مظاہرہ کیا۔ سبز کیمسٹری میں بائیوسینسرز اور نانوکومپوزائٹس نہ صرف پتہ لگانے کی صلاحیتوں کو بڑھاتے ہیں بلکہ پائیدار ترقی کے اصولوں کے مطابق ماحولیاتی خطرات کو بھی کم کرتے ہیں۔
سبز کیمسٹری کے اصول میلامین کے تعین کے لیے مختلف طریقوں پر لاگو کیے گئے ہیں۔ ایک نقطہ نظر ایک سبز منتشر سالڈ فیز مائیکرو ایکسٹریکشن طریقہ تیار کرنا ہے جس کا استعمال کرتے ہوئے قدرتی پولر پولیمر β-cyclodextrin کراس لنکڈ سائٹرک ایسڈ کے ساتھ melamine 40 کو موثر طریقے سے نکالنے کے لیے انفینٹ فارمولے اور گرم پانی جیسے نمونوں سے حاصل کیا جا سکتا ہے۔ ایک اور طریقہ دودھ کے نمونوں میں میلامین کے تعین کے لیے مانیچ ردعمل کا استعمال کرتا ہے۔ یہ طریقہ سستا، ماحول دوست، اور انتہائی درست ہے جس کی لکیری رینج 0.1–2.5 ppm اور ایک کم پتہ لگانے کی حد 41 ہے۔ مزید برآں، مائع دودھ اور بچوں کے فارمولے میں میلامین کے مقداری تعین کے لیے ایک کفایتی اور ماحول دوست طریقہ تیار کیا گیا ہے جس کا استعمال کرتے ہوئے فوئیریئر ٹرانسفارمیشن ہائی اسپیکٹو ٹرانسفارمیشن ٹرانسفارمیشن ٹرانسفارمیشن میں تیار کیا گیا ہے۔ 1 پی پی ایم اور 3.5 پی پی ایم کی حدیں، بالترتیب 42۔ یہ طریقے میلامین کے تعین کے لیے موثر اور پائیدار طریقوں کی ترقی کے لیے سبز کیمسٹری کے اصولوں کے اطلاق کو ظاہر کرتے ہیں۔
کئی مطالعات میں میلامین کا پتہ لگانے کے لیے جدید طریقے تجویز کیے گئے ہیں، جیسے سالڈ فیز ایکسٹرکشن اور ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (HPLC)43 کا استعمال، نیز تیز رفتار ہائی پرفارمنس مائع کرومیٹوگرافی (HPLC)، جس کے لیے پیچیدہ پری ٹریٹمنٹ یا آئن پیئر ریجنٹس کی ضرورت نہیں ہوتی، اس طرح کیمیکل ری ایجنٹس کی مقدار 44 فیصد تھی۔ یہ طریقے نہ صرف ڈیری مصنوعات میں میلامین کے تعین کے لیے درست نتائج فراہم کرتے ہیں بلکہ سبز کیمسٹری کے اصولوں کی تعمیل کرتے ہوئے، مضر کیمیکلز کے استعمال کو کم سے کم کرتے ہیں اور تجزیاتی عمل کے مجموعی ماحولیاتی اثرات کو کم کرتے ہیں۔
مختلف برانڈز کے چالیس نمونوں کا سہ رخی میں تجربہ کیا گیا، اور نتائج جدول 2 میں پیش کیے گئے ہیں۔ شیرخوار فارمولے میں میلامین کی سطح اور دودھ کے پاؤڈر کے نمونے بالترتیب 0.001 سے 0.004 mg/kg اور 0.001 سے 0.095 mg/kg تک تھے۔ بچوں کے فارمولے کے تین عمر گروپوں کے درمیان کوئی خاص تبدیلیاں نہیں دیکھی گئیں۔ اس کے علاوہ، 80% دودھ کے پاؤڈر میں میلمائن کا پتہ چلا، لیکن 65% شیرخوار فارمولے میلامین سے آلودہ تھے۔
صنعتی دودھ کے پاؤڈر میں میلمین کا مواد بچوں کے فارمولے سے زیادہ تھا، اور فرق اہم تھا (p <0.05) (شکل 2)۔
حاصل کردہ نتائج ایف ڈی اے کی مقرر کردہ حد سے نیچے تھے (1 اور 2.5 ملی گرام/کلوگرام سے نیچے)۔ اس کے علاوہ، نتائج CAC (2010) اور EU45,46 کی مقرر کردہ حدود کے مطابق ہیں، یعنی زیادہ سے زیادہ اجازت شدہ حد شیرخوار فارمولے کے لیے 1 mg kg-1 اور دودھ کی مصنوعات کے لیے 2.5 mg kg-1 ہے۔
Ghanati et al.47 کے 2023 کے مطالعے کے مطابق، ایران میں پیک کیے گئے دودھ کی مختلف اقسام میں میلامین کا مواد 50.7 سے 790 μg kg−1 کے درمیان ہے۔ ان کے نتائج FDA کی اجازت کی حد سے نیچے تھے۔ ہمارے نتائج Shoder et al.48 اور Rima et al.49 کے نتائج سے کم ہیں۔ شوڈر وغیرہ۔ (2010) نے پایا کہ دودھ کے پاؤڈر (n=49) میں میلامین کی سطح ELISA کے ذریعہ طے کی گئی 0.5 سے 5.5 mg/kg تک ہے۔ ریما وغیرہ۔ فلوروسینس سپیکٹرو فوٹومیٹری کے ذریعہ دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کی باقیات کا تجزیہ کیا اور پتہ چلا کہ دودھ کے پاؤڈر میں میلمائن کی مقدار 0.72–5.76 ملی گرام/کلو گرام تھی۔ 2011 میں کینیڈا میں مائع کرومیٹوگرافی (LC/MS) کا استعمال کرتے ہوئے شیرخوار فارمولہ (n=94) میں میلامین کی سطح کی نگرانی کے لیے ایک مطالعہ کیا گیا۔ میلامین کی تعداد قابل قبول حد سے کم پائی گئی (ابتدائی معیار: 0.5 mg kg−1)۔ اس بات کا امکان نہیں ہے کہ جعلی میلامین کی سطح کا پتہ چلا پروٹین کے مواد کو بڑھانے کے لیے استعمال کیا جانے والا حربہ تھا۔ تاہم، کھادوں کے استعمال، کنٹینر کے مواد کی منتقلی، یا اسی طرح کے عوامل سے اس کی وضاحت نہیں کی جا سکتی۔ مزید برآں، کینیڈا میں درآمد کیے گئے دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کا ذریعہ ظاہر نہیں کیا گیا تھا۔
حسنی وغیرہ۔ نے 2013 میں ایرانی مارکیٹ میں دودھ کے پاؤڈر اور مائع دودھ میں میلامین کے مواد کی پیمائش کی اور اسی طرح کے نتائج برآمد ہوئے۔ نتائج سے پتہ چلتا ہے کہ دودھ کے پاؤڈر اور مائع دودھ کے ایک برانڈ کے علاوہ، باقی تمام نمونے میلامین سے آلودہ تھے، جن کی سطح دودھ کے پاؤڈر میں 1.50 سے 30.32 μg g−1 اور دودھ میں 0.11 سے 1.48 μg ml−1 تک تھی۔ خاص طور پر، کسی بھی نمونے میں سائینورک ایسڈ کا پتہ نہیں چلا، جس سے صارفین کے لیے میلامین زہر کے امکان کو کم کیا گیا۔ 51 پچھلے مطالعات میں دودھ پاؤڈر پر مشتمل چاکلیٹ مصنوعات میں میلامین کی حراستی کا اندازہ لگایا گیا ہے۔ تقریباً 94% درآمدی نمونے اور 77% ایرانی نمونوں میں میلامین شامل ہے۔ درآمد شدہ نمونوں میں میلامین کی سطح 0.032 سے 2.692 ملی گرام فی کلوگرام تک تھی، جب کہ ایرانی نمونوں میں 0.013 سے 2.600 ملی گرام فی کلوگرام تک تھی۔ مجموعی طور پر، 85% نمونوں میں میلامین کا پتہ چلا، لیکن صرف ایک مخصوص برانڈ کی سطح قابل اجازت حد سے زیادہ تھی۔44 Tittlemier et al. دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کی سطح 0.00528 سے 0.0122 ملی گرام فی کلوگرام تک کی اطلاع دی گئی ہے۔
جدول 3 تین عمر کے گروپوں کے لیے خطرے کی تشخیص کے نتائج کا خلاصہ کرتا ہے۔ خطرہ تمام عمر کے گروپوں میں 1 سے کم تھا۔ اس طرح، نوزائیدہ فارمولے میں میلامین سے کوئی غیر سرطانی صحت کا خطرہ نہیں ہے۔
دودھ کی مصنوعات میں آلودگی کی نچلی سطح تیاری کے دوران غیر ارادی آلودگی کی وجہ سے ہو سکتی ہے، جبکہ زیادہ سطح جان بوجھ کر اضافے کی وجہ سے ہو سکتی ہے۔ مزید برآں، میلامین کی کم سطح کے ساتھ ڈیری مصنوعات کے استعمال سے انسانی صحت کے لیے مجموعی خطرہ کم سمجھا جاتا ہے۔ یہ نتیجہ اخذ کیا جا سکتا ہے کہ میلامین کی اتنی کم سطح پر مشتمل مصنوعات کو استعمال کرنے سے صارفین کی صحت کو کوئی خطرہ نہیں ہوتا52۔
ڈیری انڈسٹری میں فوڈ سیفٹی مینجمنٹ کی اہمیت کو مدنظر رکھتے ہوئے، خاص طور پر صحت عامہ کے تحفظ کے معاملے میں، یہ انتہائی اہمیت کا حامل ہے کہ دودھ پاؤڈر اور شیر خوار فارمولے میں میلامین کی سطح اور باقیات کا اندازہ لگانے اور موازنہ کرنے کے لیے ایک طریقہ تیار کرنا اور اس کی تصدیق کرنا۔ بچوں کے فارمولے اور دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کے تعین کے لیے ایک سادہ اور درست HPLC-UV سپیکٹرو فوٹومیٹرک طریقہ تیار کیا گیا تھا۔ اس کی وشوسنییتا اور درستگی کو یقینی بنانے کے لیے طریقہ کار کی توثیق کی گئی۔ طریقہ کار کی کھوج اور مقدار کی حد کو اتنا حساس دکھایا گیا ہے کہ شیر خوار فارمولے اور دودھ کے پاؤڈر میں میلامین کی سطح کی پیمائش کر سکے۔ ہمارے اعداد و شمار کے مطابق زیادہ تر ایرانی نمونوں میں میلامین کا پتہ چلا۔ تمام دریافت شدہ میلامین لیولز CAC کی جانب سے مقرر کردہ زیادہ سے زیادہ قابل اجازت حد سے نیچے تھے، جس سے یہ ظاہر ہوتا ہے کہ اس قسم کی ڈیری مصنوعات کا استعمال انسانی صحت کے لیے خطرہ نہیں ہے۔
استعمال ہونے والے تمام کیمیائی ریجنٹس تجزیاتی درجے کے تھے: میلامین (2,4,6-triamino-1,3,5-triazine) 99% خالص (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)؛ ایچ پی ایل سی گریڈ ایسٹونیٹرائل (مرک، ڈرمسٹڈٹ، جرمنی)؛ انتہائی صاف پانی (ملی پور، مورفیم، فرانس)۔ ڈسپوز ایبل سرنج فلٹرز (کرومافل ایکسٹرا PVDF-45/25، تاکنا سائز 0.45 μm، جھلی کا قطر 25 ملی میٹر) (Macherey-Nagel، Düren، Germany)۔
نمونے تیار کرنے کے لیے الٹراسونک غسل (ایلما، جرمنی)، ایک سینٹری فیوج (بیک مین کولٹر، کریفیلڈ، جرمنی) اور HPLC (KNAUER، جرمنی) کا استعمال کیا گیا۔
UV ڈیٹیکٹر سے لیس ایک اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگراف (KNAUER، جرمنی) استعمال کیا گیا تھا۔ HPLC تجزیہ کی شرائط حسب ذیل تھیں: ODS-3 C18 تجزیاتی کالم (4.6 ملی میٹر × 250 ملی میٹر، پارٹیکل سائز 5 μm) (MZ، جرمنی) سے لیس ایک UHPLC الٹیمیٹ سسٹم استعمال کیا گیا تھا۔ HPLC eluent (موبائل فیز) ایک TFA/methanol مرکب (450:50 mL) تھا جس کی بہاؤ کی شرح 1 mL منٹ-1 تھی۔ پتہ لگانے کی طول موج 242 این ایم تھی۔ انجیکشن کا حجم 100 μL تھا، کالم کا درجہ حرارت 20 °C تھا۔ چونکہ منشیات کی برقراری کا وقت طویل ہے (15 منٹ)، اگلا انجکشن 25 منٹ کے بعد کیا جانا چاہئے. میلامین کی شناخت برقرار رکھنے کے وقت اور میلمینی معیارات کی UV سپیکٹرم چوٹی کا موازنہ کرکے کی گئی۔
میلامین (10 μg/mL) کا ایک معیاری محلول پانی کا استعمال کرتے ہوئے تیار کیا گیا تھا اور روشنی سے دور فریج (4 °C) میں محفوظ کیا گیا تھا۔ موبائل فیز کے ساتھ اسٹاک سلوشن کو پتلا کریں اور ورکنگ اسٹینڈرڈ سلوشن تیار کریں۔ ہر معیاری حل کو HPLC میں 7 بار انجکشن کیا گیا تھا۔ انشانکن مساوات 10 کا حساب مقررہ چوٹی کے علاقے اور متعین ارتکاز کے رجعت تجزیہ سے کیا گیا تھا۔
تجارتی طور پر دستیاب گائے کے دودھ کا پاؤڈر (20 نمونے) اور گائے کے دودھ پر مبنی انفینٹ فارمولے کے مختلف برانڈز کے نمونے (20 نمونے) ایران کی مقامی سپر مارکیٹوں اور فارمیسیوں سے مختلف عمر کے گروپوں (0-6 ماہ، 6-12 ماہ، اور> 12 ماہ) کے بچوں کو کھانا کھلانے کے لیے خریدے گئے تھے اور ریفریجریٹیڈ درجہ حرارت (4 ڈگری سینٹی گریڈ) تک محفوظ کیے گئے تھے۔ پھر، 1 ± 0.01 جی ہوموجنائزڈ دودھ پاؤڈر کا وزن کیا گیا اور اسے ایسٹونائٹرائل کے ساتھ ملایا گیا: پانی (50:50، v/v؛ 5 ملی لیٹر)۔ مرکب کو 1 منٹ تک ہلایا گیا، پھر 30 منٹ تک الٹراسونک غسل میں سونیکیٹ کیا گیا، اور آخر میں 1 منٹ تک ہلایا گیا۔ اس کے بعد مرکب کو کمرے کے درجہ حرارت پر 10 منٹ کے لئے 9000 × g پر سینٹرفیوج کیا گیا اور سپرنٹنٹ کو 0.45 μm سرنج فلٹر کا استعمال کرتے ہوئے 2 ملی لیٹر آٹو سیمپلر شیشی میں فلٹر کیا گیا۔ فلٹریٹ (250 μl) کو پھر پانی (750 μl) میں ملایا گیا اور HPLC سسٹم 10,42 میں انجکشن لگایا گیا۔
طریقہ کار کی توثیق کرنے کے لیے، ہم نے بحالی، درستگی، کھوج کی حد (LOD)، مقدار کی حد (LOQ)، اور بہترین حالات میں درستگی کا تعین کیا۔ LOD کو نمونے کے مواد کے طور پر بیان کیا گیا تھا جس کی چوٹی کی اونچائی بیس لائن شور کی سطح سے تین گنا زیادہ تھی۔ دوسری طرف، سگنل ٹو شور کے تناسب سے 10 گنا زیادہ اونچائی والے نمونے کے مواد کو LOQ کے طور پر بیان کیا گیا تھا۔
ڈیوائس کے جواب کا تعین سات ڈیٹا پوائنٹس پر مشتمل ایک انشانکن وکر کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ میلامین کے مختلف مواد استعمال کیے گئے (0، 0.2، 0.3، 0.5، 0.8، 1 اور 1.2)۔ میلامین کے حساب کتاب کے طریقہ کار کی لکیری کا تعین کیا گیا تھا۔ اس کے علاوہ، خالی نمونوں میں میلامین کی کئی مختلف سطحیں شامل کی گئیں۔ انشانکن وکر کو بچوں کے فارمولے اور پاؤڈر دودھ کے نمونوں اور اس کے R2 = 0.9925 میں معیاری میلامین محلول کے 0.1–1.2 μg mL−1 کو مسلسل انجیکشن لگا کر بنایا گیا تھا۔ درستگی کا اندازہ طریقہ کار کی تکرار اور تولیدی صلاحیت سے کیا گیا تھا اور اسے پہلے اور بعد کے تین دنوں میں (تین باری میں) نمونوں کو انجیکشن لگا کر حاصل کیا گیا تھا۔ طریقہ کار کی تکراری صلاحیت کا اندازہ شامل کردہ میلامین کے تین مختلف ارتکاز کے لیے RSD % کا حساب لگا کر کیا گیا۔ صحت سے متعلق کا تعین کرنے کے لیے بازیابی کا مطالعہ کیا گیا۔ نکالنے کے طریقہ سے بحالی کی ڈگری کا حساب بچوں کے فارمولے اور خشک دودھ 9,11,15 کے نمونوں میں میلامین کے ارتکاز (0.1, 1.2, 2) کی تین سطحوں پر کیا گیا۔
تخمینہ شدہ روزانہ کی مقدار (EDI) کا تعین درج ذیل فارمولے کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا: EDI = Ci × Cc/BW۔
جہاں Ci اوسط میلامین مواد ہے، Cc دودھ کی کھپت ہے اور BW بچوں کا اوسط وزن ہے۔
ڈیٹا کا تجزیہ SPSS 24 کا استعمال کرتے ہوئے کیا گیا تھا۔ کولموگوروف-سمرنوف ٹیسٹ کے ذریعے معمول کی جانچ کی گئی۔ تمام ڈیٹا نان پیرامیٹرک ٹیسٹ تھے (p = 0)۔ لہذا، گروپوں کے درمیان اہم فرق کا تعین کرنے کے لیے کرسکل-والس ٹیسٹ اور مان-وٹنی ٹیسٹ کا استعمال کیا گیا۔
Ingelfinger، Jr. Melamine اور عالمی خوراک کی آلودگی پر اس کے اثرات۔ نیو انگلینڈ جرنل آف میڈیسن 359 (26)، 2745–2748 (2008)۔
Lynch, RA, et al. بچوں کے پیالوں میں میلامین کی منتقلی پر پی ایچ کا اثر۔ کھانے کی آلودگی کا بین الاقوامی جریدہ، 2، 1–8 (2015)۔
بیریٹ، ایم پی اور گلبرٹ، IH ٹرپینوسوم کے اندرونی حصے میں زہریلے مرکبات کو نشانہ بنا رہا ہے۔ پیراسیٹولوجی 63، 125–183 (2006) میں پیش رفت۔
تعمیر، ایم ایف، وغیرہ۔ وٹرو میں اور ویوو میں melamine dendrimers کی منشیات کی ترسیل کی گاڑیوں کے طور پر تشخیص۔ انٹرنیشنل جرنل آف فارمیسی، 281(1–2)، 129–132(2004)۔
ورلڈ ہیلتھ آرگنائزیشن۔ melamine اور cyanuric acid (2008) کے زہریلے پہلوؤں کا جائزہ لینے کے لیے ماہرین کی میٹنگز 1–4۔
Howe, AK-C., Kwan, TH اور Lee, PK-T. میلامین زہریلا اور گردے. جرنل آف امریکن سوسائٹی آف نیفرولوجی 20(2)، 245–250 (2009)۔
Ozturk, S. اور Demir, N. اعلی کارکردگی مائع کرومیٹوگرافی (HPLC) کے ذریعے ڈیری مصنوعات میں میلامین کی شناخت کے لیے ایک ناول IMAC adsorbent کی ترقی۔ خوراک کی ترکیب اور تجزیہ کا جریدہ 100، 103931 (2021)۔
Chansuvarn, V., Panic, S. and Imim, A. منچ سبز رد عمل کی بنیاد پر مائع دودھ میں میلامین کا سادہ سپیکٹرو فوٹومیٹرک تعین۔ سپیکٹرو کیم۔ ایکٹا پارٹ اے مول۔ بائیومول۔ سپیکٹروسک 113، 154–158 (2013)۔
ڈیبیس، ایم اور الحبیب، آر. ایچ پی ایل سی/ڈائیوڈ سرنی کرومیٹوگرافی کے ذریعے شیر خوار فارمولہ، دودھ کے پاؤڈر اور پینگاسیئس کے نمونوں میں میلامین کا تعین۔ جرنل آف انوائرمینٹل اینالیٹیکل ٹاکسیکولوجی، 2(137)، 2161–0525.1000137 (2012)۔
سکنر، کے جی، تھامس، جے ڈی، اور آسٹرلوہ، جے ڈی میلمین زہریلا۔ جرنل آف میڈیکل ٹوکسیکولوجی، 6، 50-55 (2010)۔
ورلڈ ہیلتھ آرگنائزیشن (ڈبلیو ایچ او)، میلامین اور سائینورک ایسڈ کے زہریلے اور صحت کے پہلو: ہیلتھ کینیڈا، اوٹاوا، کینیڈا، 1-4 دسمبر 2008 (2009) کے تعاون سے WHO/FAO کے تعاون سے متعلق ماہرین کی میٹنگ کی رپورٹ۔
کورما، ایس اے، وغیرہ۔ نوول فنکشنل سٹرکچرل لپڈس اور کمرشل انفینٹ فارمولے پر مشتمل انفینٹ فارمولا پاؤڈر کے لپڈ کمپوزیشن اور کوالٹی کا تقابلی مطالعہ۔ یورپی فوڈ ریسرچ اینڈ ٹیکنالوجی 246, 2569–2586 (2020)۔
الواصف، ایم اور ہاشم، ایچ۔ پام آئل کے استعمال سے غذائیت کی قیمت، معیار کی خصوصیات اور شیر خوار فارمولے کی شیلف لائف میں اضافہ۔ زرعی تحقیق کا مشرق وسطی کا جرنل 6، 274–281 (2017)۔
ین، ڈبلیو، وغیرہ۔ میلامین کے خلاف مونوکلونل اینٹی باڈیز کی پیداوار اور کچے دودھ، خشک دودھ اور جانوروں کی خوراک میں میلامین کی کھوج کے لیے بالواسطہ مسابقتی ELISA طریقہ تیار کرنا۔ جرنل آف ایگریکلچرل اینڈ فوڈ کیمسٹری 58(14), 8152–8157 (2010)۔